Le ore 00:00 rappresentano la mezzanotte, ovvero l'istante esatto in cui inizia il nuovo giorno nel sistema a 24 ore. Corrisponde all'inizio del periodo notturno e segna il passaggio dal giorno precedente a quello attuale. Nel formato a 12 ore, questo momento è indicato come 12:00 AM (o mezzanotte).
Nel sistema orario a 24 ore il giorno inizia a mezzanotte, indicata come 00:00, e finisce con il passare dell'ultimo minuto, quello corrispondente alle 23:59. Tuttavia, la notazione 24:00 può essere utilizzata nel caso in cui il riferimento sia alla mezzanotte del giorno passato o alla fine esatta del giorno corrente.
La m. civile è, in un dato luogo, l'istante (corrispondente alle ore 24) in cui si ha la m. media al meridiano centrale del fuso orario al quale il luogo appartiene; è lo stesso per tutti i punti appartenenti a uno stesso fuso orario, e segna per essi l'inizio del giorno civile.
Tradizionalmente la mezzanotte è la fine del giorno. Un secondo dopo la mezzanotte è l'inizio del giorno successivo. Quindi la domenica a mezzanotte è la fine della domenica e subito prima dell'inizio del lunedì.
Oggi il giorno comincia a mezzanotte (ora indicata con "00:00", inclusa) e termina con la mezzanotte successiva (24:00, esclusa). Questo uso è dovuto al diffondersi degli orologi meccanici ed era detto "alla francese".